期刊简介
本刊是我国核医学领域的权威性和专科性杂志，全面反映我国医用核仪器、核试剂的研制，实验核医学研究，临床核医学方法的建立与提高，体外分析方法的创新和推广等，及时报道我国核医学临床科研工作的重大进展，促进国内外核医学学术交流。2007年中华医学会与万方数据携手推动医药信息服务，该刊电子版已独家授权万方数据来实现其数字化服务推广。
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首页>中华核医学与分子影像杂志
- 杂志名称：中华核医学与分子影像杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：2095-2848
- 国内刊号：32-1828/R
- 出版周期：双月刊
期刊荣誉：国家“双效”期刊期刊收录：上海图书馆馆藏, 国家图书馆馆藏, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 维普收录(中), CA 化学文摘(美), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中)
重组HIF-1α及NIS慢病毒表达载体的构建及功能鉴定
石朔；郭睿；王利华；张敏；张淼；苗莹；李彪
关键词：缺氧诱导因子1, α亚基, DNA, 重组, 质粒, 转染, 钠/碘转运体
摘要：目的 构建肌凝蛋白轻链-2(MLC-2v)启动下HIF-1 α及人NIS慢病毒真核表达载体,探讨外源基因在心肌细胞中的特异性表达和NIS作为报告基因的可行性.方法 应用基因重组技术构建慢病毒(Lv)-延长因子(EF) 1-HIF-1α-内部核糖体进入位点(IRES)-NIS及Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS慢病毒表达载体.对重组质粒进行酶切、测序鉴定后,采用脂质体转染法将重组质粒转入Hela细胞.细胞免疫荧光及Western blot分别验证HIF-1α及NIS蛋白在细胞中的定位及定量表达;制备重组病毒,分别以不同的感染复数(MOI)感染H9C2大鼠心肌细胞、NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞和L6大鼠骨骼肌成肌细胞,Western blot确定佳MOI并验证MLC-2v启动子的特异性;分别行H9C2细胞动态摄碘和NaClO4抑制实验.采用两样本t检验分析数据.结果 成功构建Lv-EF1-HIF-1α-IRES-NIS及Lv-MLC-HIF-1 α-IRES-NIS慢病毒表达载体.2种质粒分别转染Hela细胞,免疫荧光显示HIF-1α蛋白表达于胞质,NIS蛋白表达于胞膜;Western blot显示EF1启动下2种蛋白质的表达量多于MLC-2v启动下相应表达.Western blot蛋白检测后测定蛋白灰度值,阳性对照组NIS及HIF-1α灰度值分别为69.8和71.9,EF1启动下分别为109.4和92.7,MLC-2v启动下分别为141.9和132.4.Lv-MLC-HIF-1α-IRES-NIS病毒感染H9C2细胞,MOI为20时NIS蛋白表达高,为佳MOI.2种病毒以MOI为20分别感染H9C2、NIH-3T3及L6细胞,Western blot显示EF1启动下NIS蛋白在3种细胞中均有表达,灰度值分别为23.4、29.8和28.6,相差较小.MLC-2v启动下仅H9C2细胞中有大量NIS蛋白表达,NIS蛋白在H9C2、L6及NIH-3T3细胞的灰度值分别为157.9、178.8和217.3.H9C2细胞的摄碘高峰时间为40 min,峰值为4 287.2计数·min-1,是阴性对照组(254.4计数·min-1)的16.85倍(t=5.34,P＜0.01).摄碘可被NaClO4抑制,抑制率达85.5％(t =21.3,P＜0.01).结论 MLC-2v可启动治疗基因HIF-1α及报告基因NIS在心肌细胞中特异性表达,表达的NIS蛋白具有摄碘功能,为NIS作为报告基因监测外源基因的靶向治疗奠定了基础.
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